什么是质粒转化,怎么操作呢? - 什么是质粒转化,怎么操作呢?

1.基本原理 

将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化（ Transformation ）。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中胀大为球状（感受态细菌的制备，见前）。质粒 DNA 与 CaCl 2 构成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经 42℃ 短时刻热冲击处理，促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培育基上生长数小时后，球状细胞恢复并分裂增殖。被转化的细菌中，外源基因得到表达。在选择性培育平板上，可选出所需的转化子（即含有质粒 DNA 的细菌）。钙处理的感受态细胞，一般每微克 DNA 能取得 10 5 ～ 10 6 个转化子。除化学办法转化细菌外，还有电穿孔法（ Electroporation ），其转化率可高达 10 9 ～ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。

2.器材 

①培育皿  ②恒温培育箱

3.试剂 

① LB 培育基

②选择性 LB 琼脂培育平板（含氨苄青霉素，终浓度为 50μg/ml ）

③氨苄青霉素 100 mg/ml

④宿主细菌：经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α

4.操作过程 

①取 50 μL 大肠杆菌感受态细胞，参加适量质粒（体积不得超过 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 热激 90 s ，马上放回冰上，冰浴 2 min ；

②加 400 μL LB 培育基，于 37℃ 摇床慢摇振动培育 45-60 min ；

③取 50-100 μL 涂在含有氨苄青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固体培育基上， 37℃ 倒置培育过夜。